Jgm анализ крови что это

Методика иммуноферментного анализа применяется в различных отраслях медицины. Но в большинстве случаев данным методом диагностируют широкий круг инфекционных заболеваний, таких как вирус иммунодефицита человека, гепатит, герпес и прочих инфекций половых органов. Также иммуноферментный анализ применяют для выявления онкомаркеров различного происхождения, определения гормонов и при диагностике репродуктивной функции организма.

Дорогие читатели! Наши статьи рассказывают о типовых способах решения проблем со здоровьем, но каждый случай носит уникальный характер.

Если вы хотите узнать, как решить именно Вашу проблему - начните с программы похудания. Это быстро, недорого и очень эффективно!


Узнать детали

Значение анализов на антитела IgG, IgM, IgA в диагностике инфекций

В онлайн-лаборатории Lab4U мы хотим, чтобы каждый из вас мог заботиться о своем здоровье. Для этого мы просто и понятно рассказываем о показателях организма. В онлайн-лаборатории Lab4U делаются серологические исследования для обнаружения антигенов возбудителя и специфических антител к ним — это самый точный метод диагностики инфекционных заболеваний.

Такой вопрос может возникнуть после направления врача в лабораторию. Попробуем на него ответить. Антитела — это белки, которые иммунная система вырабатывает в ответ на проникновение инфекции. Общим правилом подготовки к анализу на антитела является сдавать кровь из вены натощак после приема пищи должно пройти не менее четырех часов.

Иногда серологический анализ на антитела является единственным способом диагностики инфекционных заболеваний. Референсные значения показатели нормы антител можно получить с результатом анализа. Иммуноферментный анализ определяет антитела инфекций относящиеся к различным классам Ig G, A, M. Однако, один из самых распространенных анализов — госпитальный скрининг анализы на ВИЧ, сифилис и гепатиты B и С не дифференцирует тип антител, поскольку наличие антител к вирусам данных инфекций автоматически предполагает хроническое течение заболеваний и является противопоказанием, например, для серьезных хирургических вмешательств.

Поэтому важно опровергнуть или подтвердить диагноз. Детальную диагностику типа и количества антител при диагностированном заболевании можно сделать, сдав анализ на каждую конкретную инфекцию и тип антител.

Первичная инфекция выявляется при обнаружении диагностически значимого уровня антител IgM в образце крови или значимым ростом числа антител IgA или IgG в парных сыворотках, взятых с интервалом недели. Реинфекция, или повторная инфекция, выявляется быстрым подъемом уровня антител IgA или IgG.

Антитела IgA имеют более высокую концентрацию у пациентов старшего возраста и более точно диагностируют текущую инфекцию у взрослых. Перенесенная инфекция в крови определяется как повышенные антитела IgG без роста их концентрации в парных образцах, взятых с интервалом 2 недели. При этом отсутствуют антитела классов IgM и А. Их концентрация повышается вскоре после заболевания. Антитела IgM определяются уже через 5 дней после его начала и достигают пика в промежутке от одной до четырех недель, затем снижаются до диагностически незначительных уровней в течение нескольких месяцев даже без проведенного лечения.

Однако, для полной диагностики недостаточно определения только антител класса М: отсутствие этого класса антител еще не говорит об отсутствии заболевания. Острой формы заболевания нет, но может быть хроническая.

Антитела IgM имеют большое значение в диагностике гепатита А и детских инфекций краснуха, коклюш, ветрянка , легко передающихся воздушно-капельным путем, так как важно как можно раньше выявить заболевание и изолировать заболевшего. Для полной диагностической картины необходимо определить антитела IgA и IgG одновременно. При неясном результате IgA, подтверждение осуществляется определением IgM. Результаты анализа должны интерпретироваться в комплексе с информацией, полученной в других диагностических процедурах.

Антитела IgG, в частности, используются для диагностики Helicobacter pylori — одной из причин язвы и гастрита. Уровень антител IgA обычно снижается к месяцу после инфицирования в случае успешного лечения. При повторном инфицировании уровень антител IgA вновь возрастает.

Если уровень IgA не падает после проведенного лечения, то это — признак хронической формы инфекции. Аббревиатура TORCH появилась в х годах прошлого столетия, и состоит из заглавных букв латинских названий группы инфекций, отличительной особенностью которых является то, что при относительной безопасности для детей и взрослых, TORCH инфекции при беременности представляют чрезвычайную опасность.

Нередко, заражение женщины инфекциями TORCH-комплекса во время беременности наличие в крови только антител IgM является показанием для ее прерывания. Иногда, обнаружив в результатах анализа антитела IgG, например, токсоплазмоза или герпеса, пациенты приходят в панику, не посмотрев на то, что антитела IgM, которые показывают наличие текущей инфекции, могут отсутствовать вовсе. В этом случае анализ говорит о перенесенной ранее инфекции, к которой выработался иммунитет.

В любом случае, интерпретацию результатов анализа лучше доверить врачу, и с ним же в случае необходимости определиться с тактикой лечения. А сдать анализы вы можете доверить нам. TORCH инфекции комплексный анализ. Антитела к вирусу простого герпеса. Годовой абонемент входит в состав первого заказа и дает возможность год Вам и членам Вашей семьи сдавать анализы в два раза дешевле. Результаты всех анализов бессрочно будут храниться в личном кабинете.

В Lab4U приняты меры для выполнения анализов в штатном режиме. Запишитесь на анализы на сайте, а в медцентре только сдайте биоматериал. Это минимизирует ваши социальные контакты и снижает риск заражения вирусом. Годовой абонемент Годовой абонемент входит в состав первого заказа и дает возможность год Вам и членам Вашей семьи сдавать анализы в два раза дешевле.

Антитела или иммуноглобулины осуществляют защиту индивида от вирусов и болезнетворных микроорганизмов.

Как проводится и что показывает иммуноферментный анализ

Уважаемые клиенты! Для физических лиц: запись в Центры Хеликс , запись на бесконтактное тестирование на дому. Для юридических лиц: оставьте заявку через форму обратной связи. Услуг заказано: 0. Результаты поиска: Количество результатов: 0. Версия для печати. COVID распространяется между людьми воздушно-капельным путем при прямом контакте или по воздуху на расстоянии около полутора метров друг от друга.

После инфицирования симптомы COVID могут появиться в течение двух недель, в основном это лихорадка, кашель, одышка. Среди других симптомов отмечают насморк, потерю обоняния, головную боль, слабость, диарею и тошноту. Считается, что пожилые люди, беременные женщины, люди с хроническими заболеваниями, курильщики находятся в группе повышенного риска.

Также встречается бессимптомное носительство вируса, носителями чаще всего становятся дети и молодые взрослые. Они могут передавать вирус другим людям при контакте, при этом у них самих не развиваются симптомы заболевания. IgM-антитела производятся первыми, их уровень быстро нарастает в начале инфекции, достигая максимума в острый период болезни, а затем постепенно снижается, полностью исчезая к моменту выздоровления.

IgG-антитела также появляются в крови в острой стадии инфекционного процесса, но максимальная их выработка происходит обычно через дней после перенесенной инфекции.

Качественное исследование отображает наличие или отсутствие антител в крови, но не определяет их концентрацию. Для этого выполняют количественный тест, который показывает титры антител, что позволяет определить стадию инфекционного процесса и дает возможность рассчитать напряженность иммунитета, то есть уровень невосприимчивости к данной инфекции.

Лабораторная служба Хеликс. Личный кабинет клиента Личный кабинет врача. Ваш город Санкт-Петербург? О службе. Анализы База знаний Акции Страницы Адреса. База знаний в вашем смартфоне или планшете. Пересчёт единиц измерения. Синонимы русские Синонимы английские Метод исследования Как правильно подготовиться к исследованию?

Общая информация об исследовании Для чего используется исследование? Когда назначается исследование? Что означают результаты? Что может влиять на результат? Важные замечания Кто назначает исследование? Метод исследования Иммуноферментный анализ. Как правильно подготовиться к исследованию?

Не принимать пищу в течение часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду. Не курить в течение 30 минут до исследования.

Инфекционный процесс сопровождается выработкой антител двух типов: IgM и IgG. Для чего используется исследование? Для диагностики бессимптомного течения болезни в первые несколько дней после заражения IgM. Положительный результат Наличие текущего заболевания в поздней стадии инфекционного процесса; перенесенное заболевание, в том числе с бессимптомным течением.

Сомнительный результат Рекомендуется повторить анализ через дня. В случае получения повторного сомнительного результата образец считать отрицательным. КП: 0,00 - 0, Санкт-Петербург , Б. Сампсониевский пр-т, д.

Что означает анализ на антитела к инфекции: IgG и IgM

Опубликовал: Parazitolog в Диагностика 16 февраля, Наличие в организме положительных антител igg является показателем о произошедшем контакте организма с цитомегаловирусом, и что сам пациент имеет нормальный иммунитет к данному заболеванию. В лабораторной диагностике именно антитела служат маркером проникновения инфекции. Общим правилом подготовки к анализу на антитела является сдавать кровь из вены натощак после приема пищи должно пройти не менее четырех часов.

В современной лаборатории сыворотку крови исследуют на автоматическом анализаторе с использованием соответствующих реагентов. Иногда серологический анализ на антитела является единственным способом диагностики инфекционных заболеваний. Норма антител для каждой инфекции своя для некоторых их не должно быть совсем.

Обычно референсные значения показатели нормы антител можно получить с результатом анализа. Антитела или иммуноглобулины — это особые белковые молекулы.

Их производят В-лимфоциты плазматические клетки. Распознав чужеродную субстанцию — антиген, антитело прикрепляется к ней с помощью так называемого белкового хвостика. Они отличаются по массе, по составу, и, что самое главное, по свойствам. IgE и IgD содержатся в сыворотке крови в малом количестве и не имеют диагностической ценности. IgM — первый иммуноглобулин, который начинает вырабатывать организм в ответ на инфекцию.

Он обладает высокой активностью, стимулирует различные звенья иммунитета. Он обеспечивает основной иммунный ответ. Более половины всех выделяемых во время болезни иммуноглобулинов относятся именно к этому классу. Антитела класса G настолько малы, что могут проходить через плаценту.

Именно антитела, переданные ребенку от матери во время беременности, защищают новорожденного в первые месяцы его жизни. IgA в основном локализуется в слизистых оболочках дыхательных путей, желудка, кишечника и мочеполовой системы.

То есть там, где болезнетворные микроорганизмы чаще всего проникают в наш организм. Этот класс иммуноглобулинов как бы связывает чужеродные вещества и не дает им прикрепиться к поверхности слизистых оболочек. Иммуноферментный анализ определяет антитела инфекций относящиеся к различным классам Ig G, A, M. Антитела к вирусу, при наличии инфекции, определяются на очень ранней стадии, что обеспечивает эффективную диагностику и контроль течения заболеваний. Самые распространенные методы диагностики инфекций — это тесты на антитела класса IgM острая фаза течения инфекции и антитела класса IgG устойчивый иммунитет к инфекции.

Эти антитела определяют для большинства инфекций. Детальную диагностику типа и количества антител при диагностированном заболевании можно сделать, сдав анализ на каждую конкретную инфекцию и тип антител. Первичная инфекция выявляется при обнаружении диагностически значимого уровня антител IgM в образце крови или значимым ростом числа антител IgA или IgG в парных сыворотках, взятых с интервалом недели.

Реинфекция, или повторная инфекция, выявляется быстрым подъемом уровня антител IgA или IgG. Антитела IgA имеют более высокую концентрацию у пациентов старшего возраста и более точно диагностируют текущую инфекцию у взрослых. Перенесенная инфекция в крови определяется как повышенные антитела IgG без роста их концентрации в парных образцах, взятых с интервалом 2 недели. При этом отсутствуют антитела классов IgM и А.

Концентрация антител к определенной инфекции помогает поставить диагноз, определить уровень иммунитета после вакцинации, выявить скрытые заболевания. Чаще всего анализы на антитела назначают при подозрении на такие заболевания или для контроля их лечения , как:. Анализ на иммуноглобулины определенного класса могут также назначить также при:.

Исследование актуально и для выявления аутоиммунных заболеваний. При выявлении причин бесплодия могут назначить анализ на антитела к ХГЧ или на антиспермальные антитела. При беременности проводится исследование на антитела к резус-фактору. Анализы на антитела к вирусам и другим инфекционным агентам проводятся исключительно по назначению врача. Кровь на анализы на антитела сдается натощак. Забор биоматериала осуществляется из вены.

Перед проведением исследования пациенту желательно избегать эмоциональных перегрузок, не заниматься тяжелой физической работой, не посещать спортзал и не принимать алкоголь. Аббревиатура TORCH появилась в х годах прошлого столетия, и состоит из заглавных букв латинских названий группы инфекций, отличительной особенностью которых является то, что при относительной безопасности для детей и взрослых, TORCH инфекции при беременности представляют чрезвычайную опасность.

Нередко, заражение женщины инфекциями TORCH-комплекса во время беременности наличие в крови только антител IgM является показанием для ее прерывания. Определение уровня иммуноглобулинов проводится с помощью иммунофлюоресцентного анализа, или ИФА. На поверхность специальной планшетки помещают небольшое количество сыворотки крови и очищенного антигена.

После этого добавляют вещество, которое окрашивает иммунный комплекс. По интенсивности окраски определяют концентрацию иммуноглобулинов в сыворотке крови. Метод ИФА чувствителен даже к небольшому количеству иммуноглобулинов и обладает высокой специфичностью. Это значит, что результаты исследования будут достоверными и точными. Обычно исследование занимает 1—2 рабочих дня.

Некоторые лаборатории готовы выдать срочный результат уже через 2—3 часа, но стоимость будет примерно вдвое выше.

Правильно интерпретировать результаты анализа на иммуноглобулины может только врач. Он учитывает не только показатели в бланке исследования, но и состояние пациента, симптомы заболевания или их отсутствие, данные других исследований.

Каждая лаборатория использует свои тест-системы, потому результаты анализов, проведенных в разных диагностических центрах, могут отличаться. Указанные в статье границы являются ориентировочными.

Иммуноглобулин класса А повышается при хронических инфекциях, при муковисцидозе, при поражении печени. Также антитела этого типа могут активно вырабатываться при аутоиммунных болезнях. Снижение титра антител происходит при атопическом дерматите, некоторых заболеваниях крови и лимфатической системы. А также при нарушении синтеза белковых молекул и приеме некоторых лекарств. IgM повышается при остром воспалении, пневмонии, синуситах, бронхите, болезнях кишечника и желудка.

Выход концентрации за верхнюю границу нормы может говорить о поражении печени, паразитарных заболеваниях, а также о миеломной болезни.

Понижение уровня IgM наблюдается при нарушениях синтеза белка или поражениях иммунной системы. Это может происходить после удаления селезенки, при большой потере белка, при лечении цитостатиками и другими препаратами, которые подавляют иммунитет, при лимфоме, а также при некоторых врожденных состояниях. В отличие от предыдущих иммуноглобулинов, уровень IgG отличается у мужчин и женщин с самого рождения. IgG может повыситься при хронических инфекциях, при аутоиммунных заболеваниях, при паразитарных заболеваниях, саркоидозе, муковисцидозе, при поражении печени, миеломе и гранулематозе.

При ВИЧ-инфекции уровень IgG может быть как крайне высоким, так и крайне низким, в зависимости от стадии заболевания и состояния иммунной системы. С антителами к резус-фактору все немного проще. В норме их не должно быть. Если антитела обнаружены, значит, произошла иммунизация во время предыдущей беременности или при переливании донорской крови.

Аутоантитела в норме также должны отсутствовать. Их наличие говорит о развитии аутоиммунных заболеваний. Существует огромное количество видов исследований на обнаружение антител. Например, комплексный анализ на TORCH-инфекции токсоплазма, краснуха, цитомегаловирус, герпес , который необходимо сдавать при планировании беременности, будет стоить — рублей. Анализ на антитела к резус-фактору обойдется примерно в — рублей. Анализ на антитела к определенным инфекциям стоит от до рублей.

При этом стоит учитывать, что определение, например, IgG и IgM — это два разных исследования, каждое из которых нужно будет оплачивать отдельно. Определение антиядерных антинуклеарных антител обойдется примерно в — рублей, антиспермальных — — рублей, анализ на антитела к тиреоглобулину и тиреопероксидазе стоит примерно — рублей. Нужно также заложить в расходы около — рублей за взятие крови.

Анализ крови для определения уровня иммуноглобулинов проводят многие лаборатории. Но как выбрать ту, где его проведут одновременно быстро, качественно и недорого? Выбирая лабораторию, обратите внимание на перечень анализов. Чем больше этот список, тем более широкими возможностями для диагностики обладает лаборатория.

Еще один фактор — время, через которое вам обещают результат. Большинство лабораторий отводят на это исследование 2—3 дня, некоторые предоставляют услуги срочного анализа — 1 день. При заборе крови обратите внимание на процедурный кабинет, его оснащение, используемые расходные материалы. Все должно быть стерильным: обычно прямо при вас медсестра протирает стол, подушечку и т. Это гарантия вашей безопасности. Еще один фактор — удобство. Не стоит ехать через весь город, чтобы сдать анализ на антитела на 20—30 рублей дешевле.

За время дороги вы можете испытать физические или эмоциональные перегрузки, из-за которых результаты будут искажены. Итак, выбирайте лабораторию или медицинский центр с современным медицинским оснащением, широким перечнем анализов, находящийся недалеко от вашего дома либо по пути на работу или учебу. Если эта лаборатория работает много лет и успела набрать определенный авторитет среди врачей и пациентов — это дополнительный плюс.

Анализ крови на паразитов - информативный метод диагностики. Не пропусти Хирургическая стоматология как важный элемент сохранности вашей белоснежной улыбки Саркоптоз у кошек. Что нужно знать и как лечить Опасное соседство: что делать, если атаковали клопы Коронавирус в России.

Новости, советы и рекомендации. Содержание статьи: 1 Что значит антитела 2 Антитела как показатель состояния иммунной системы 3 Различные классы антител IgG, IgM, IgA 4 Когда может быть назначен анализ крови на антитела 5 Подготовка к исследованию и процедура сдачи крови 6 Анализ на антитела в диагностике TORCH-инфекций 7 Суть исследования 8 Расшифровка результатов анализа на антитела 8.

Антитела были открыты в году Э.

Перечень доступных методик диагностики в последние десятилетия быстро расширяется, диагносты пытаются в новых методах объединить преимущества всех прежних анализов, избавившись от всех их прежних недостатков.

Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ сокращённо ИФА , англ. Выявление образовавшегося комплекса проводят с использованием фермента в качестве метки для регистрации сигнала. Теоретические основы ИФА опираются на современную иммунохимию и химическую энзимологию, знание физико-химических закономерностей реакции антиген-антитело, а также на основные принципы аналитической химии.

ИФА является одним из наиболее активно развивающихся направлений химической энзимологии. Высокая стабильность реагентов, простота методов регистрации, возможность создания каскадных систем усиления различных химических сигналов, относительно низкая цена и многие другие достоинства метода ИФА способствовали его широкому внедрению в различные области медицины, сельское хозяйство, микробиологическую и пищевую промышленность, охрану окружающей среды, а также в научные исследования.

По одним лишь вариантам регистрации ферментативной активности возможно применение фотометрических, флуорометрических, био- и хемолюминесцентных методов, а в ряде случаев особенно связанных с решением технологических задач успешно применяются электрохимические и микрокалориметрические датчики.

Иммунохимическая реакция в растворе протекает в несколько стадий, первой из которых является обратимое образование комплекса между антителами и антигенами состава вследствие наличия в молекуле антител более одного центра связывания для поливалентных антигенов возможно дальнейшее многостадийное образование сложных комплексов с различным соотношением компонентов.

Образование комплекса обеспечивается гидрофобными , ионными , ван-дер-ваальсовыми и водородными связями. Наиболее существенную роль играют силы гидрофобного взаимодействия, которые стабилизируют всю систему уменьшают её свободную энергию при одновременном увеличении энтропии. Эффективность таких взаимодействий возрастает с повышением температуры. В простейшем случае взаимодействие одного центра связывания антитела AT с одновалентным антигеном AG может быть представлено схемой.

Очевидно, что чем меньше Kd или же, наоборот, больше Ka , тем прочнее образующийся иммунокомплекс. Константа комплексообразования является термодинамическим параметром, характеризующим изменение свободной энергии взаимодействия антиген-антитело, которое может быть рассчитано по формуле:. Изменение энтропии в большинстве случаев положительно, так как активные центры антител в свободном виде доступны растворителю и гидратированы, а при взаимодействии с антигеном из них высвобождаются связанные молекулы воды, что приводит к уменьшению общей упорядоченности системы.

Таким образом, говоря об иммунологической специфичности антител, всегда проводят сравнительную оценку эффективности антиген-антитело, которое характеризуется константой равновесия или изменением свободной энергии системы при комплексообразовании. Ранее для количественного описания эффективности взаимодействия антиген-антитело за основу была взята простая модель взаимодействия одновалентного антигена и одновалентного антитела. Но так как молекула антитела имеет несколько антигенсвязывающих центров и, кроме того, способна взаимодействовать с несколькими антигенными детерминантами одной молекулы антигена, то такая характеристика образования иммунохимического комплекса является весьма упрощённой.

Для описания более близкого к реальности процесса взаимодействия поливалентного антитела с поливалентным антигеном введён термин авидность , или функциональная аффинность функциональное сродство. С биологической точки зрения именно функциональная аффинность играет основную роль в иммунном ответе на инфицирование организма вирусами или бактериями, имеющими на своей поверхности повторяющиеся антигенные детерминанты.

Процесс образования комплекса антиген-антитело состава , в котором реализуются поливалентные взаимодействия, также является обратимым и может быть охарактеризован константой комплексообразования.

С энергетической точки зрения образование поливалентного комплекса намного выгоднее, чем моновалентного. Например, эффективная константа комплексообразования IgG может в и более раз превышать константу одиночных связей. Весьма важной и часто используемой на практике характеристикой ферментов является их каталитическая активность. За единицу каталитической активности 1 каталь любого фермента принимают такое его количество, которое катализирует превращение 1 моль субстрата в 1 с в реакционной смеси при определённых условиях.

Однако до сих пор часто употребляется старое обозначение каталитической активности, известное как международная единица МЕ , англ. U , определённое как количество фермента, катализирующее превращение 1 ммоль субстрата в 1 мин. Соотношение между этими единицами следующее:. Для сравнительной оценки различных препаратов фермента часто используют удельную каталитическую активность , то есть каталитическую активность, отнесённую к единицу массы белка.

На скорость ферментативной реакции оказывают влияние различные факторы, среди которых основными являются:. Температурные зависимости имеют сложный вид, что обусловлено как термолабильностью белковых молекул, так и влиянием температуры на константы Михаэлиса , константы скоростей распада отдельных фермент-субстратных комплексов и положение pH -оптимума.

В области низких температур, когда структура активного центра достаточно стабильна, константа скорости распада фермент-субстратного комплекса описывается уравнением типа Аррениуса. Диапазон pH -оптимума активности может быть весьма узким. Он зависит от ионной силы и вида используемого буфера, меняется с температурой. Определяемая каталитическая активность сильно зависит от используемого субстрата, которые могут быть как природными, так и синтетическими, при этом скорости их превращения также значительно варьируют.

К эффекторам относят как ингибиторы, так и активаторы ферментативных реакций, то есть вещества, оказывающие замедляющее или ускоряющее действие на превращение субстрата.

В некоторых случаях для ферментативных реакций наблюдается ингибирование высокими концентрациями субстрата или одним из продуктов реакции. Наличие в реакционной среде эффекторов может приводить к нежелательному отклонению скорости ферментативной реакции от линейной зависимости с количеством фермента в системе.

В ИФА наибольшее распространение получил фотометрический метод регистрации активности ферментов. В качестве субстратов ферментов при этом используют такие вещества, продукты превращения которых являются окрашенными соединениями или, наоборот, окраска самих субстратов изменяется в процессе реакции. Окрашенные соединения поглощают видимый свет, то есть электромагнитное излучение с длинами волн — нм. Поглощение света подчиняется закону Бугера-Ламберта-Бера , в соответствии с которым оптическая плотность раствора в определённом диапазоне прямо пропорциональна концентрации вещества.

Для измерения оптической плотности используется спектрофотометр. В последнее время в ИФА получили распространение субстраты, которые образуют продукты, регистрируемые флуориметрическим методом. Молекула при поглощении фотона переходит из основного электронного состояния в возбуждённое. Возбуждённая молекула может вернуться в основное состояние, при этом избыток энергии перейдёт в теплоту, но может произойти обратный процесс перехода электрона на основной уровень, сопровождающийся выделением кванта света, который носит название флуоресценции.

Благодаря частичной потере энергии при переходе молекулы из возбуждённого состояния в основное длина волны испускаемого света всегда больше длины волны поглощаемого света.

Интенсивность флуоресценции пропорциональна количеству света, адсорбированного образцом. Таким образом, она прямо пропорциональна концентрации растворённого вещества и абсолютному значению начальной интенсивности света, в то время как в фотометрии сравниваются относительные интенсивности, адсорбированные образцом. Этот факт позволяет на порядка повысить чувствительность определения вещества в растворе флуориметрическим методом по сравнению с фотометрическим. За скоростью таких реакций следят по интенсивности свечения реакционной системы, регистрируемой с помощью люминометра.

Реакции биолюминесценции катализируются люциферазами светляков и бактерий, а реакция окисления циклических гидразидов перекисью водорода реакция хемолюминесценции катализируется пероксидазой хрена.

Известны также электрохимические способы определения активности ферментов, используемых в качестве меток в иммуноанализе. Такие датчики позволяют определить скорость ферментативных реакций в мутных средах и удобны для создания проточных иммуноферментных ячеек.

В иммуноферментных методах анализа в качестве метки антигенов и антител могут использоваться как ферменты, так и их субстраты. После проведения всех иммунохимических стадий любого метода ИФА необходимо установить концентрацию меченного ферментом компонента иммунохимической реакции, то есть определить каталитическую активность фермента в пробе.

По наблюдаемой скорости реакции судят о концентрации фермента-маркёра в системе. Следует отметить, что ИФА всегда строится на сравнительном определении в идентичных условиях стандартного и измеряемого образца, в связи с чем требование пропорциональности скорости и концентрации является скорее желательным, чем обязательным. Достаточным является существование взаимно однозначного соответствия между количеством образовавшегося продукта ферментативной реакции и количеством фермента в системе.

Принципиальная возможность применения ферментов в качестве меток в ИФА обусловлена чрезвычайно высокой чувствительностью регистрации ферментов в растворе.

Причём принципиально возможным является значительное уменьшение пределов обнаружения ферментов как за счёт увеличения времени ферментативной реакции, так и увеличения чувствительности регистрации образовавшегося продукта. К выбору ферментных меток в ИФА предъявляется ряд общих требований. Основными являются следующие:.

Все три фермента определяются на уровне пикомолярных концентраций. Наиболее доступной является пероксидаза хрена. Она содержит легко окисляемые перйодатом углеводные остатки, через которые может осуществляться связывание фермента с антителами или антигенами. В состав субстратной системы для измерения активности пероксидазы фотометрическим способом входят хромогены, дающие при окислению перекисью окрашенные соединения. Каталитическую активность глюкозооксидазы регистрируют с теми же хромогенами, что и активность пероксидазы, однако чувствительность её определения по сравнению с пероксидазой несколько ниже.

Основным достоинством фермента служит полное отсутствие его в плазме крови, что даёт возможность использования этого фермента в гомогенных методах ИФА реагенты для всех стадий ИФА находятся в водном растворе. Щелочная фосфатаза и её конъюгаты имеют высокую стабильность и низкий предел обнаружения, однако имеет относительно высокую стоимость. Разработаны сверхчувствительные ферментативные системы, позволяющие детектировать в растворе до нескольких тысяч молекул щелочной фосфатазы, основанные на использовании в качестве субстрата молекулы НАДФ.

Образующийся в результате ферментативного гидролиза продукт НАД определяется в ферментативной системе регенерации кофактора. Она катализирует гидролиз лактозы с образованием глюкозы и галактозы. Во всех коммерческих тест-системах используется пероксидаза хрена, выбор которой определяется её высокой удельной каталитической активностью, доступностью, стабильностью, простотой детекции.

В качестве субстратного реагента наиболее часто применяется орто-фенилендиамин ОФД или тетраметилбензидин ТМБ с перекисью водорода, продукт окисления которых регистрируется фотометрически. Учёт результатов проводят спектрофотометрически при длине волны — нм. К настоящему времени разработано большое число различных вариантов проведения ИФА, имеющих как принципиальные, так и второстепенные отличия.

Единая чёткая классификация всего многообразия методов ИФА в литературе отсутствует, что затрудняет выявление общих закономерностей и проведение сравнительной оценки возможностей различных методов. Обычно рассмотрение методов ИФА осуществляется с позиций разделения на гетерогенные и гомогенные, то есть по принципу проведения всех стадий анализа с участием твёрдой фазы или же только в растворе. Так как процесс образования иммунохимических комплексов происходит в строго количественном соотношении, обусловленном аффинностью, концентрациями компонентов и условиями реакции, то достаточным для определения исходной концентрации анализируемого соединения является количественная оценка образовавшихся иммунных комплексов.

В случае анализа антигенов для проведения такой оценки существует два подхода:. Очевидно, что в последнем случае число образовавшихся иммунных комплексов определяется по разности общего числа добавленных антител и числа антител, оставшихся свободными. Классические методы ИФА основаны на образовании антителами в присутствии антигена преципитата осадка , однако для визуальной регистрации процесса преципитации необходимы высокие концентрации компонентов и длительное время проведения реакции.

К тому же, результаты такого анализа не всегда можно однозначно интерпретировать и в большинстве случаев они носят качественный или полуколичественный характер. Кроме того, для многих одновалентных антигенов гаптенов , например, гормонов и лекарственных соединений, эти методы непригодны. Индикация образовавшегося комплекса антиген-антитело в растворе может быть осуществлена, если в один из исходных компонентов реакционной системы ввести метку, которая легко детектируется соответствующим высокочувствительным физико-химическим методом.

Весьма удобными для этой цели оказались изотопные, ферментные, флуоресцентные, парамагнитные метки, использование которых дало возможность увеличить чувствительность иммунохимических методов в миллионы раз, а время анализа уменьшить до нескольких часов. Так как процесс комплексообразования происходит в строго количественном отношении, то концентрация метки, входящей в состав комплекса, однозначно связана с исходной концентрацией антигена.

Для осуществления анализа эффективности комплексообразования необходимо провести полную очистку комплексов от свободных компонентов. Эту задачу оказалось легко решить, если один из компонентов пары антиген-антитело прочно связать иммобилизировать на твёрдом носителе. Иммобилизация позволяет предотвратить агрегацию в растворе и осуществить физическое разделение образующихся комплексов от свободных компонентов. Использование иммобилизации антител на твёрдом носителе положило начало методам твердофазного гетерогенного ИФА.

Особую значимость для широкого внедрения твердофазного ИФА в практику имела разработка в качестве носителей для сорбционной иммобилизации антител и антигенов специальных полистирольных плат, содержащих 96 лунок. Факт сорбции антител на поверхности полистирола был установлен в середине х годов и использован первоначально в методах радиоиммунологического анализа РИА.

Введение полистирольных плат в практику ИФА позволило значительно увеличить число проводимых анализов и упростить методическую процедуру его выполнения. Были сконструированы специальные приборы, позволяющие автоматизировать стадии добавления реагентов, промывки и осуществлять одновременную регистрацию каталитической активности фермента-метки в каждой из лунок планшеты.

Гетерогенный твердофазный ИФА в микропланшетном варианте получил наибольшее распространение в тест-системах для клинических лабораторных исследований. В качестве твёрдой фазы используется поверхность лунок полистиролового микропланшета, на которую адсорбированы входящие в состав тест-системы известные антигены или антитела называемые в этом случае иммуносорбентом.

В ходе специфической реакции иммуносорбента с определяемыми в исследуемом образце антителами или антигенами образуются иммунные комплексы, которые оказываются фиксированными на твёрдой фазе. Субстанции, не участвовавшие в реакции, а также избытки реагентов, удаляются при многократной промывке.

ВИДЕО ПО ТЕМЕ: Анализ крови RW

Комментариев: 3

  1. alexandr195454:

    Появилась хурма из Израиля. Сладкая и вкусная…

  2. valya:

    lastozka5, чего уж тут не понять,”всё вкруг родное,всё вокруг моё…”)

  3. Ростик:

    Алексей, “что бы” правильно пишется “чтобы”. См. школьный курс за 6 класс. А “что бы” напишешь в фразе: “Что бы мне почитать, чтобы стать грамотным”. Без обид…